Ludger DMB唾液酸释放标记试剂盒问题集锦

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【技术问答】Ludger DMB唾液酸释放标记试剂盒问题集锦

来源:作者:人气:-发表时间:2018-04-12 09:21:00【

Ludger DMB唾液酸释放标记试剂盒FAQs

Q: 为什么要同时使用beta-巯基乙醇和亚硫酸钠,两个都是抗氧化的?
A: Sodium Dithionite (Reductant) 亚硫酸钠是作为还原剂存在的。巯基乙醇是溶解还原剂的。
 
Q: 如果β巯基乙醇是用来溶解低亚硫酸钠的话,为什么不直接用水溶解?是否还有别的作用?
A: 巯基乙醇可以让标记后的产品更稳定。
 
Q: 硫酸或醋酸或唾液酸酶能不能将抗体分子上唾液酸完全解离或切除下来?假如可以,用什么方法可以证明它们能将抗体分子上唾液酸完全解离或切除下来?
A: 作为阳性对照,我们建议使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白,我们同样建议使用最纯化的LudgerBioQuantTM糖肽标准品来作为阳性对照。这个糖肽标准品(货号: BQ-GPEP-A2G2S2-10U)是一个复杂的N-连接双触角聚糖,终止于两个N-乙酰神经氨酸。使用此标准品可以检查聚糖释放、标记和回收的有效性,并可增强您的唾液酸测量准确性。
 
Q: 唾液酸分NeuAc和NeuGC,我检测时NeuGC的量很少,能否合并计入到唾液酸的含量中?
A: 不可以。NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神经氨酸)的定量分析是监管机构在生物制药表征的产品标准规格指南中提出的一个要求。特别是,人类和非人类的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分别)相对水平测定是非常重要的,因为有些病人有高水平的抗神经氨酸(anti-NeuGc)抗体,这可导致中和反应和快速清除含有神经氨酸(NeuGc)的生物药品 (Nguyen等,2005)。由于唾液酸(NeuAc)和神经氨酸(NeuGc)在分析糖蛋白中具有重要意义,它通常被认为是生物治疗药物的关键质量属性(CQA)。
 
Q: 关于非人源的N-羟乙酰神经氨酸在唾液酸中的含量限定,国际上有没有相关的资料参考,因为N-羟乙酰神经氨酸对人体有害,在新药研发中,有没有对它的含量限定标准?
A:目前没有这种NGNA含量的国际规定,只能是厂家根据产品性质及相关资料进行风险评估。非人唾液酸N-羟乙酰神经氨酸含量当然是越低越好。国际上目前还没有这个具体规定。但这个问题其实并不是问题。因为CHO细胞本身低表达唾液酸,一般不到5%,并且主要是以人源的N-乙酰神经氨酸为主。
 
Q: 用 LT-KDMB-A1 DMB 唾液酸释放标记试剂盒和超高压色谱柱LS-UR2-2.1x100 ,空白是跟样品平行处理的,洗脱程序也是按照说明书程序,最后加了个洗脱程序。做出来的图谱:溶剂和样品峰有重叠,在2.5min左右;而ludger的图谱:溶剂和样品峰是分开的。如果使溶剂峰和样品峰分来,是否能通过调整色谱条件和流动相,给些建议?
A: 将用50%乙腈洗脱改成现在用90%乙腈洗脱,溶剂和样品峰可以分开了,原因可能是之前用50%乙腈没有洗脱干净,柱子里有残留溶剂峰。
 
Q: DMB 唾液酸释放标记试剂盒(# LT-KDMB-A1 )够用22个样品,收集够20个左右的样品要1-2个月,时间比较长,问试剂盒能否分批使用,还是要一次用完?
A: DMB试剂本身不稳定,要在用的当天现配现用。即不能分批使用,要一次用完。
 
Q: 同时做20个样品进样,第一天和第二天跑出来的图谱 重复性不太好,会有偏差,这个有没有方法避免?
A: 具体偏差在多少?我们现行的质控标准将偏差设为±20%,如果在这个范围之内,是属于正常现象。
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